中华人民共和国国家标准
新城疫检疫技术规范
1 主题内容与适用范围
本标准规定了新城疫群体检疫、个体检疫、实验室检验和检疫后处理的技术规范。
本标准适用于鸡和其他可感染新城疫的禽类。
2 引用标准
GB 16548-1996 畜离病害肉尸及其产品无害化处理规程
3 群体检疫
对养禽场、独立饲养的禽群及外售、外运的禽群施行检疫。
3．1 查明疫病背景
通过询问兽医人员或检查疫病记录，核查被检禽场(群、室)在过去一年内是否出现过新城疫临诊病 例，是否有与新城疫病例接触史，周围2
km范围内是否发生过新城疫。
3．2查清免疫状况
通过查验免疫证明或查询其他资料。核查被检禽群是否己按规定注射合格疫苗。如按规定免疫并正处于规定的保护期内，禽只健康状况良好，被认为免疫合格。如免疫不符合规定要求，要以合格疫苗再次接种，隔离饲养观察至群体抗体滴度达25以上。全群健康，认为免疫合格；观察期内发现疑似新城疫病禽，须按3．3条和3．4条要求进一步检查。
3．3群体临床检查
首先要作静态检查。让禽群处于静止状态，观察营养状况、精神状态、呼吸、粪便、鼻及口腔分泌物有否异常。然后观察禽只运动状况，有否跛行、共济尖凋、痉挛等异常现象。检查中重点注意以下情况：
a. 精神沉郁或无任何症状而死亡；
b． 体温升高、食欲减退、精神萎顿、产蛋减少或停止；
C． 口腔和鼻腔分泌物增多，嗉囊胀满；
d． 呼吸困难、喉部发出“咯咯”声(晚间较明显)；
c． 下痢、粪便成绿色；
f． 偏头转颈，作转圈运动或共济失调。
若发现疑似病例，按3．4条要求进一步检查。同时对全群隔离饲养。
3．4病理解剖检查
对临诊疑似病例，应全部必抽样解剖，依据下述病变作出初步判断：
a．口腔、咽喉部有粘液，咽部粘膜出血；
b．腺胃乳头肿胀，挤压后有豆腐渣样坏死物流出，乳头有散在的出血点；
c． 肌胃角质下层有条纹状或点状出血，有时见不规则溃疡，腺胃与肌胃交接处有出血斑、条；
d.小肠前段有大面积散在出血点,或肠粘膜有纤维性坏死并形成假膜,假膜下出现红色粗崐糙溃疡；
e.盲肠和直肠皱褶处有出血，盲肠扁桃体（淋巴滤泡）出血坏死；
f.气管粘膜充血、出血、气管内有粘液；
g.心冠脂肪、心耳外膜及心尖脂肪上有针尖状小出血点。
4 个体检查
4.1在无群体检疫条件的场合，须进行个体检疫。个体检疫合格的禽只一般供食用，如继续饲养应隔离三周，经观察无异后，方准与其他禽只混养。
4.1.1查明是否来自疫区。
4.1.2查验免疫证明。
4.1.3临诊检查和病理解剖检查。
检查内容参照3.3条和3．4条进行，发现疑似新城疫染疫禽只，立即作无害化处理。
5 实验室检验
5.1 下列情况进行实验室检验
a.产地定期检疫；
b.监测免疫状况；
c.疑似病鸡的定性，或临诊解剖检查初步诊断为新城疫，需进一步确诊；
d.检疫中发现重大疫情（如禽流感），须作鉴别诊断；
e.行政主管部门、饲养单位、售购或争议双方要求进行实验室诊断。
5.2 实验室检验方法
a.病毒分离鉴定试验，见附录Ａ（补充件）。
b.血凝抑制试验，用于免疫监测，见附录Ｂ（补充件）。
6 检疫后的处理
6.1经临床检查、解剖检查和实验室诊断等综合判定，确诊为新城疫的禽只，按 ＧＢ 16548处理。
6.2经初步诊断为新城疫可疑的禽群（禽只），按下述方法之一处理：
a. 除将可疑禽只按6.1条处理外，全群隔离饲养，并进行紧急免疫接种，如在接种后观察期内出现可疑禽只，亦按6.1条处理。观察21d后，对临床健康崐，免疫滴度达到２５以上的禽只，经体表消毒后按健康禽只对待。
b. 经初步诊断为新城疫可疑的禽群（禽只），在全群隔离饲养的同时，对可疑禽只采样作实验室诊断，如确为新城疫者，全群即按6.1条处理。
6.3 发生过新城疫的禽场在半年之内，其禽只不准出售、外运。
附录A 病毒分离鉴定试验 （补充件）
A1 仪器设备
a.注射器：1mＬ；
b.注射针头：5～5 1/2号；
c.血凝试验板：V型、96孔；
d.微量移液器：50μＬ；
e.恒温箱；
f.超净工作台或无菌室。
A2 试剂
a.无菌生理盐水；
b.青霉素；
c.链霉素；
d.标准血清。
A3 样品采集及处理
A3.1 活禽用气管拭子和泄殖腔拭子（或粪）。
A3.2 死禽以脑为主；也可采心、肝、肺、肾、气囊等组织。
A3.3 样品用生理盐水研成1：5乳液；拭子浸入2～3mＬ生理盐水中，反复吸挤压至无水滴出，弃之。溶液中加入青霉素（使终浓度为1000单位/mＬ）、链霉素（使终浓度为1mg/mＬ）。泄殖腔拭子（或粪）样品，青霉素、链霉素量提高5倍。然后调
pH7.0～7.4，37℃作用1h，再1000r/min离心10min，取上清0.1mL经尿囊腔接种9～10日龄SPF鸡胚。
A4 培养物的收集及检测
A4.1 培养4～7d的尿囊液经无菌采集后－20℃保存。
A4.2 尿囊液按附录B（补充件）作血凝试验，并与标准阳性血清作血凝抑制试验， 确定有无新城疫病毒繁殖。
A4.3 MDT（最小病毒致死量引起鸡胚死亡的平均时间）的测定：将新鲜尿囊液用生理盐水连续10倍稀释，10-6～10-9的每个稀释度接种5个9～10日龄SPF鸡胚，每胚0.1mL，37℃孵化。余下的病毒保存于4℃，8h后以同样方法接种第二批鸡胚，连续7d内观察鸡胚死亡时间并记录，测定出最小致死量，即引起接种鸡胚的最大稀释倍数。计算MDT。
A4.4 以MDT确定病毒的致死力强弱，40～70h死亡为强毒，140h以上为弱毒。
附录B 鸡新城疫微量红细胞凝集抑制试验 （补充件）
B1 仪器设备
a. 微量血凝板： V型、96孔；
b．微型振荡器;
c．塑料采血管；
d．移液器：50μL。
B2试剂
B2.1稀释液 pH7.0～7.2磷酸缓冲盐水 氯化钠(GB1266梷77) 170 g 磷酸二氢钾(GB1274梷77)
13．6 g 氢氧化钠(GB629梷77) 3．0 g 蒸馏水 1000 mL 高压灭菌，4℃保存，使用时作20倍稀释
B2．2浓缩抗原
B2．30．5％红细胞悬液 采成年鸡血，用20倍量磷酸缓冲盐水洗涤3～4次，每次以2000 r／min离心3～4min，最后一次5min，用磷酸缓冲盐水配成0．5％悬液。
B2．4标准阳性血清
B3 被检血清
每群鸡随机采血20～30份血样，分离血清。 采血法：无用三棱针刺破翅下静脉，随即用塑料管引流血液至6～8
cm长。将管一端烧融封口，待凝固析出血清后以1000 r／min离心5 min，剪断塑料管，将血清倒入一块塑料板小孔中。若需较长时间保存，可在离心后将凝血块一端剪去，滴融化石蜡封口，于0℃保存。
B4操作方法
B4．1微量血凝试验
B4．1．1 于微量血凝板( B1．1)的每孔中滴加稀释液( B2.1)50μL，共滴四排。
B4．1．2 吸取 1：5稀释抗原滴加于第一列孔，每孔50μL，然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔，再从第11列孔各吸取50μL弃之。最后一列不加抗原作对照。
B4．1．3 于每孔中加入0．5％红细胞悬液(B2．3)50μL。
D4．1．4 置微型振荡器( B1．2)上振荡1min，或手持血凝板绕圆圈混匀。
D4．1．5 放室温下(18～20℃)30～40 min。根据血凝图象判定结果。 以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度。每次四排重复，以几何均值表示结果。
B4．1．6 计算出含4个血凝单位的抗原浓度。按式(Bl)进行计算： 抗原应稀释倍数=血凝滴度/4....................(B1)
B4．2 微量血凝抑制试验
B4．2．1先取稀释液( B2．1)50μL，加入微量血凝板(B1．1)的第 l孔，再取浓度为4个血凝单位的抗原依次加入3～12孔，每孔50μL，第2孔加浓度为8个血凝单位的抗原50μL。
B4．2．2吸被检血清( B3)50μL于第 l孔(血清对照)中，挤压混匀后吸50μL，于第2孔，依次倍比稀释至第12孔，最后弃去50μL。
B4．2．3置室温(18～20℃)下作用20 min。
B4．2．4滴加50μL0．5％红细胞悬液( B2.3)于各孔中，振荡混合后，室温下静置30～40
min，判定结果。
B4．2．5每次测定应设已知滴度的标准阳性血清( B2．4)对照。
B5结果判定
B5．1在对照出现正确结果的情况下，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制滴度。
B5．2若有10％以上的鸡出现11 ( log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。
B5．3若监测鸡群的免疫水平，则血凝抑制滴度在4( log2)的鸡群保护率为50％左右；在4（log2）以上的保护率达90％～100％；在4(1og2)以下的非免疫鸡群保护率约为9％，免疫过的鸡群约为43％。鸡群的血凝抑制滴度以抽样样品的血凝抑制滴度的几何平均值表示，如平均水平在
4(log2)以上，表示该鸡群为免疫鸡群。
附加说明：
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准由农业部动物检疫所负责起草。
本标准主要起草人仰惠芬、杨承谕、郑志刚。
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